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組織病理切片制備流程

2017/06/09 10:12:00   次點擊

組織病理切片按照制備方法的不同分為石蠟切片、冰凍切片和振動切片。 

石蠟切片制備過程包括取材、固定、洗滌和脫水、透明、浸蠟、包埋、切片與粘片、脫蠟、染色、脫水、透明、封片等步驟。一般從取材固定到封片制成玻片標本需要數日。 

冰凍切片(frozen section)是一種在低溫條件下使組織快速冷卻到一定硬度,然后進行切片的方法。制作過程不需要對組織固定、脫水、透明、包埋等手續,避免組織細胞中可溶性物質的分解,并能保存細胞形態的原。與石蠟切片相比,在抗原完整性的保存上有其不可取代的優勢,尤其在免疫組化方面。因此冷凍切片也是脂肪染色、酶組織化學染色以及某些免疫組織化學染色和原位分子雜交的理想制片方法。不足是組織細胞的形態略遜于石蠟切片。 

    振動切片在文獻中討論較少。制備方法是采用的專用振動切片機,利用刀片振動原理,將新鮮的活體組織,直接固定在切片槽中切片。該方法能保持樣品活性和細胞良好形態,給免疫細胞化學研究及脊髓和腦薄片神經生物學研究提供了良好條件,適合做組織電生理學等研究。 

   不同切片方法由于制作的工藝流程不同,所需的儀器設備和工具有差別。 

一、石蠟切片的制作 

根據文獻報道石蠟切片法包括取材、固定、洗滌和脫水、透明、浸蠟、包埋、切片與粘片、脫蠟、染色、脫水、透明、封片等步驟。 1.固定 

用適當的固定液浸漬新鮮材料,凝固或沉淀細胞和組織中的物質成分、終止細胞的一切代謝過程、防止細胞自溶或組織變化,使組織硬化,盡可能保持活體時的結構。固定時間從1小時至數天,通常為數小時至24小時。  

2.洗滌與脫水 

組織在固定后要把滲入里面的固定液洗去,否則留在組織中的固定液有的會妨礙染色,有的會產生沉淀或結晶。 

固定后或洗滌后的組織內充滿水分,如不除去水分就無法進行以后的透明、浸蠟與包埋,因為透明劑多數是苯類,苯類和石蠟均不能與水相融合,水分不脫盡,苯類不能浸入。因此,在透明、浸蠟前必須進行脫水。脫水就是利用脫水劑將組織內的水分置換出來,以利于有機溶劑的滲入。常用用的脫水劑為一系列不同濃度的乙醇。 

脫水步驟是:80%、90%、95%、100%各種濃度乙醇2小時,此過程可用脫水機自控完成。 3.透明 

組織脫水后,因乙醇不溶于石蠟,為使石蠟能浸入組織塊,必須經過一種既能與酒精相混合,又能溶解石蠟的溶劑的替代過程,通過這種溶劑的媒介作用替換出組織內的酒精,而達到石蠟浸入組織塊的目的。材料塊在這類媒浸液中浸漬,出現透明狀態,此液即稱透明劑,透明劑浸漬過程稱透明。 

目前最好的透明劑是二甲苯。通常組織先經純酒精和透明劑各半的混合液浸漬1~2小時,再轉入純透明劑中浸漬。  

4.浸蠟與包埋 

組織透明后,放入熔化的石蠟內浸漬,使石蠟滲入組織同時取代組織內的二甲苯,這個過程稱浸蠟。 

浸蠟用的石蠟熔點在56℃,浸蠟應在高于石蠟熔點3℃左右的溫箱中進行。 

  將熔化好的石蠟倒入包埋框,用加溫的鑷子將浸蠟后的組織材料塊切面朝下放入,待蠟液表層凝固即迅速冷卻,完全凝固后即做成含有組織塊的蠟塊。  5.切片 

包埋好的蠟塊用刀片修整蠟塊成方形或者長方形,在切片機上切成一片接著一片的4~7um的蠟帶,用毛筆輕輕托起放在紙上。  

6. 展片、撈片和烤片 

展片:用眼科鑷子鑷起蠟帶輕輕平鋪在40~45℃的水面上,借水的張力和水的溫度,將略皺的蠟帶自然展平。 

撈片:待切片在恒溫水面上充分展平后,將蠟片撈到載玻片的中1/3和下1/3的中間,傾去載玻片上的余水。 

烤片:一般在60℃的溫箱內烤片0.5~1小時左右,脫去溶化組織間隙的石蠟。  

7.切片脫蠟及水化 

干燥后的切片需脫蠟及水化才能在水溶性染液中進行染色。如果脫蠟不干凈,切片不易著色或著色不勻,脫蠟用的二甲苯要經常更換因此。因此H.E染色前還需用二甲苯脫蠟,再逐級經梯度酒精脫苯、直至蒸餾水復水。 8.染色 

蘇木精(Hematoxylin)和伊紅(曙紅,Eosin)染色法是組織學標本及病理切片標本的常規染色,簡稱HE染色。H.E染色后還需切片脫水、透明、封固處理。 所需儀器設備:全自動染色機  9.切片脫水、透明和封片 

染色后的切片尚不能在顯微鏡下觀察,需經從低濃度到高濃度的酒精梯度脫水、二甲苯透明。 

取出切片,擦去多余二甲苯,滴一滴中性樹膠,將蓋玻片復蓋于切片上。


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